Caderno de Farmácia

A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1838), em 1884, e que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica. Essa técnica permite a separação de amostras bacterianas em Gram-positivas e Gram-negativas e a determinação da morfologia e do tamanho das amostras analisadas. (Veja mais)

Objetivos

a- Aprender a preparar esfregaço de bactérias;

b- Realizar a técnica de Coloração de Gram;

c- Aprender o fundamento do método de coloração de Gram;

d- Comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas;

e- Permitir a observação da morfologia bacteriana e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de Gram.

Interpretação

O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da parede celular, sendo que as Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-negativas, uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. Durante o processo de coloração, o tratamento com álcool-acetona extrai os lipídeos, daí resultando uma porosidade ou permeabilidade aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativas.

Assim, o complexo cristal violeta-iodo (CVI) pode ser retirado e as bactérias Gram-negativas são descoradas. A parede celular das bactérias gram-positivas, em virtude de sua composição diferente, torna-se desidratada durante o tratamento com álcool-acetona, a porosidade diminui, a permeabilidade é reduzida e o complexo CVI não pode ser extraído.

Outra explicação baseia-se também em diferenças de permeabilidade entre os dois grupos de bactérias. Nas Gram-positivas, o complexo CVI é retido na parede após tratamento pelo álcool-acetona, o que causa, provavelmente, uma diminuição do diâmetro dos poros da camada de glicopeptídeo ou peptideoglicano da parede celular. A parede das bactérias Gram-negativas permanece com porosidade suficientemente grande, mesmo depois do tratamento com álcool acetona, possibilitando a extração do complexo CV-l.

Procedimentos:

a- Preparar esfregaços a partir de culturas puras de Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Serratia marcescens.

b- Corar os esfregaços pelo método de coloração de Gram.

c- Observar ao microscópio óptico, sob imersão e identificar a morfologia deste microrganismos e sua reação frente ao método de Gram.

Preparo do esfregaço:

a- Pegar uma lâmina limpa no recipiente, secar e flambar rapidamente na chama do bico de Bunsen;

b- Identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço;

c- Flambar a alça bacteriológica deixá-la esfriar e colocar na lâmina uma gota de solução salina fisiológica;

d- Flambar a agulha bacteriológica, deixar esfriar próximo a chama, abrir a placa com a cultura teste e tocar a colônia escolhida para retirada da amostra,

e- Esfregar o material com movimentos de rotação da alça bacteriológica, para se obter um esfregaço de forma oval, bem fino e uniforme;

f- Deixar secar nas proximidades da chama;

g- Fixar o esfregaço passando a lâmina (lado oposto ao esfregaço) 5 vezes na chama do bico de Bunsen (rapidamente).

Método de Coloração de Gram:

Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar um minuto;
Lavar rapidamente em água destilada;
Cobrir a lâmina com solução de Iugol (mordente) por um minuto;
Lavar em água destilada;
Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool absoluto (cerca de 15 segundos). Lavar a lâmina rapidamente em água corrente;
Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;
Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar);
Colocar uma gota de óleo de cedro sobre a lâmina e observar em objetiva de imersão (IOOX).

RESULTADO:

bactérias Gram-positivas: roxo
bactérias Gram-negativas: rosa/vermelho

Observações:

O descoramento para mais ou para menos é resultante da incorreta diferenciação pelo álcool-acetona.

A idade da cultura bacteriana tem Importância fundamental na coloração de Gram. Em culturas envelhecidas, células. Gram-positivas freqüentemente se tomam Gram-negativas.

Se houver um questionamento acerca da Gram-positividade ou da Gram-negatividade da cultura, uma coloração de Gram paralela é aconselhável. Para isto, deve-se usar culturas bacterianas conhecidas como Gram-positivas, tal como Staphylococcus aureus e Gram-negativas, tal como Escherichia coli, como controles.

Resumo

Soluções em ordem de aplicação	Reação do aspecto das bactérias Gram-positivas	Reação do aspecto das bactérias Gram-negativas
Cristal violeta	Coradas em violeta	Coradas em violeta
Solução de Iugol	Formação do complexo CV-I no interior da célula, que permanece violeta	Formação do complexo CV-I no interior da célula, que permanece violeta
Álcool-acetona	Desidratação da parede celular, diminuição da porosidade e da permeabilidade; o complexo CV-I não pode sair da célula, que permanece violeta	Extração dos lipídeos da parede celular, aumento da porosidade; o complexo CV-I é removido da célula
Fucsina ou safranina	A célula não é afetada, permanece violeta	A célula adquire o corante, tornando-se vermelha

Bibliografia

Material retirado de: http://www.uff.br/bacteriologia/aulaspraticas/coloracaodegram.htm 07/08/2014 às 19:15hs.
http://www.icb.ufmg.br/mic/index.php?secao=material&material=19

O Farmacêutico

Farmacêutico

Sois aquele
Que com colírios alivias os olhos
Dando soluções as doenças
Comprimindo a cura
Drageando e mascarando sabores
Encapsulando a fé
E emulsionando, tu uniste impossivelmente a água e o óleo.

Farmacêutico
Sois aquele
Que do sangue
Conseguistes dosar o normal
Contando uma a uma
Células do início da vida
E de excrementos
Que todos rejeitam
Tu descobristes utilidades
Para o diagnóstico

Farmacêutico
Vives no mundo obscuro
No mundo da pesquisa
Dedicando-se ao descobrimento de substâncias
Que a humanidade desconhece
Mas tu sabes o prazer da descoberta
E a vitória de um desafio.

Farmacêutico
Sois aquele que estais ao lado do leito hospitalar
Como um contra regra da saúde
Obstinado a providenciar o medicamento
Sem o intuito de que, algum dia uma voz caminhe a ti, e diga:
Obrigado, o medicamento que tu adquiristes foi de grande valia.

Farmacêutico
Entre posologias
E contra indicações
Continuas enfrentando todas reações adversas
Pois o efeito colateral
É causado por aqueles que não valorizam
Que tu sempre buscas o benefício
Assumindo todos os riscos.

(Sérgio Luis Gomes da Silva - Farmacêutico)

Ao Cavaleiro do Medicamento

Sua missão é em favor dos outros e livre de qualquer desprezo

Suas paixões terão a frente o compromisso e o dever social

A reputação adquirida deverá sempre fazer jus aos méritos recebidos

Suas doutrinas e ousadia mudarão paradigmas

Livros e candelabro serão seus companheiros na eterna jornada que tem a enfrentar

Veja cavaleiro, o brilhantismo de suas descobertas trarão esperança a quem dela necessita

Seu coração esbanjará nobreza e suas mãos empunharão o mágico poder da cura

Sinta cavaleiro, as magnitudes de seus atos fascinarão o mundo da ciência

O laboratório se transformará na nave erudita do conhecimento, quando sua meta for aniquilar a doença

Ouça cavaleiro, o clamor daqueles que necessitam de sua assistência

Doenças, pragas e pestes envolvem o mundo e suas funções estão postas em prova

A Farmácia é seu solene castelo imperial, e dela será sempre seu guardião

Trabalho e serenidade estarão presentes no seu pergaminho de formulações, pois este será seu mapa de orientação

Várias vezes, sobrepujará em suas cabeças o véu da incerteza, mentalidades infrutíferas tentarão abalar seus conceitos, indiferença e ausência de reconhecimento farás tu mesmo duvidar de suas reais dimensões

Neste momento, a meditação e seu propósito de vida trará de volta a radiante luz da inspiração

E as expectativas herdarão novos motivos para acreditar

Caminhos novos serão traçados e cavalgarás por nações, religiões, culturas e raças e em todas elas levará seu legado, legítimo e verdadeiro

Liberta-te das correntes do comodismo e assuma seu papel, ó farmacêutico !

Pois tu és o cavaleiro do medicamento

Faça da educação sua espada

Da honra seu escudo

E da ética, sua eterna armadura!

(Ricardo Ferreira Nantes - Farmacêutico bioquímico)

Contagem de Reticulócitos

Aula prática de Hematologia

A contagem de reticulócitos é o método mais simples para estudo da função eritropoética.
Os reticulócitos são eritrócitos jovens, recém-liberados pela medula óssea e que ainda contém o RNA ribossômico.
Não é fundamental que o exame de reticulócitos seja realizado durante a hemorragia, somente depois de 3 a 4 dias (período de produção da eritropoiese nesses casos), o reticulócito só é lançado no sangue periférico depois do 3º dia, tal exame após esse período, é importante para verificar se houve resposta da medula óssea na eritropoiese.
A função do exame de reticulócitos, é verificar a atividade da medula óssea em relação à eritropoiese (funcionamento da medula na produção de eritrócitos).
O valor de referencia dos reticulócitos é de 0,5% a 1,5%, no sangue periférico.
A coloração é realizada com azul de cresil brilhante, também conhecida como supravital. Esse corante evidencia as organelas.

Materiais e Reagentes:

Lâmina de vidro;
Lâminas distensoras;
Corante Azul de cresil brilhante;
Tubos de ensaio;
Banho-maria à 37°C;
Microscópio óptico;
Óleo de Imersão.

Procedimento:

Colocar o sangue no tubo de hemólise na proporção de 1:1, ou seja, partes iguais de corante e sangue (colhido por punção venosa com anticoagulante) em tubos de ensaio (gotas)
Homogeneizar e colocar em banho-maria á 37°C por 10 minutos.
Retirar do banho-maria. Agitar e retirar uma gota para fazer uma lâmina (para leitura na objetiva).
Secar e examinar ao microscópio sob imersão.
Contar 10 campos, anotando o número de reticulócitos encontrados.
Expressar o resultado em percentagem e número absoluto. (O material contado é o que são as bolinhas azuis que contém tipo uma estrela dentro da hemácia).
Opcionalmente pode-se fazer coloração de fundo por Giemsa.

OBS: Referência varia de 0,5 a 1,5 % do total do número de hemácias.

Cálculos:          Reticulócitos em 10 campos
                    ------------------------------------------- = % de reticulócitos
                                               10

% de reticulócitos x Hm/ml
------------------------------------------- = reticulócitos/ml de sangue
100

Interpretação
O resultado é expresso em percentual e em número absoluto em relação a população de eritrócitos. Sua contagem serve para avaliar de forma efetiva a produção de eritrócitos, sendo útil no controle terapêutico, no diagnóstico diferencial e na classificação das anemias.

Valores normais:

No adulto.............................0,5 a 1,5% ou 25.000 a 75.000/mm3 sangue

Obs.: estes valores aparecem discretamente aumentados na gravidez.

Recém-nascidos possuem maior numero de reticulócitos. O exame também é solicitado em casos de hemorragia e anemias hemolíticas (quando as hemácias são destruídas em grande quantidade).

Contagem de reticulócitos corrigida
Um paciente com um determinado grau de anemia deve ter a sua contagem de reticulócitos corrigida para que se determine o número de reticulócitos de acordo com o grau de anemia, o que muitas vezes mostra que uma contagem de reticulócitos normal pode estar tendo uma representatividade baixa para o paciente.

Veja a técnica e um exemplo:
Porcentagem de reticulócitos x hct do paciente
Hct normal
Sabendo que um hematócrito considerado normal tem valor igual a 45% que representa a porcentagem da parte sólida do sangue e supondo que na contagem convencional a porcentagem de reticulócitos deste paciente tenha dado 1,2% e seu hematócrito 29:
Índice de reticulócitos = 1,2 x 29 = 0,77
45
O que parecia uma contagem normal igual a 1,2% de reticulócitos passou a ser uma contagem abaixo do normal.

Causas de reticulocitoses
1. Esferocitose
2. Drepanocitose
3. Eritroblastose Fetal
4. Anemia aguda pós-hemorrágica
5. Anemia hemolítica autoimune adquirida
6. Hemoglobinúria Paroxística noturna
7. Resposta terapêutica satisfatória nas anemias carenciais

Causas de reticulopenias
1. Anemia Aplástica
2. Crise aplástica de anemia hemolítica
3. Anemias Megaloblásticas
A Reticulocitose é um bom índice da resposta terapêutica das anemias por carência de fatores hematopoiéticos.
Uma anemia ferropriva responde à administração de ferro com reticulocitose até a sua inteira correção.
Reticulocitose na ausência de perdas sanguíneas ou tratamento de estados carenciais com ferro, folatos ou vitamina B12 é bastante indicativo de hemólise.

Leia também:
Hematopoiese
Contagem de Hemácias e índices hematimétricos
Eritropoiese

FONTE

http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Eritropoese&lang=3
http://pt.wikipedia.org/wiki/Hematopoiese
http://pt.wikipedia.org/wiki/Eritr%C3%B3cito
http://pt.slideshare.net/andersongalvao2012/resumo-hemato
http://hematologiacarlao.blogspot.com.br/2009/03/contagem-de-reticulocitos-e-plaquetas.html
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAw-0AF/contagem-reticulocitos

Teste do Bafômetro: dá para escapar?

Em 1954, um médico do Departamento de Polícia de Indiana (Estados Unidos) desenvolveu um aparelho que seria capaz de identificar a concentração de álcool no sangue por meio da análise do ar presente nos pulmões. Em vez de sistemas eletrônicos, os bafômetros do doutor Robert Borkenstein realizavam misturas químicas com várias soluções, sendo que a concentração alcoólica era revelada pela análise da cor do líquido gerado na reação – e não mostrada em um visor eletrônico, como acontece atualmente.

Todos os tipos de bafômetros são baseados em reações químicas. Os reagentes mais comuns são dicromato de potássio e célula de combustível. A diferença entre estes dois reagentes é que o dicromato muda de cor na presença do álcool enquanto a célula gera uma corrente elétrica.

O passo-a-passo do funcionamento do bafômetro

Você dá um gole e, em poucos segundos, o álcool começa a ser absorvido pelo estômago, cai na corrente sanguínea e passa em forma de vapor para os pulmões. O processo inverso é bem mais longo.

É necessário 1 litro e meio de ar para fazer a medição, um sopro de cerca de 5 segundos.

1. Com a ajuda de um catalisador, o álcool expirado reage com o oxigênio presente no aparelho.

2. A reação libera ácido acético, íons de hidrogênio e elétrons.

3. Os elétrons passam por um fio condutor, gerando corrente elétrica. Quanto mais álcool, maior a corrente: um chip faz as contas e dá a concentração de álcool no sangue.

4. Ao fim do processo, sobra só água na forma de vapor.

A margem de erro do aparelho é de 0,007 mg/l (para quantidades menores de 0,4 mg/l), ou seja, cerca de 1%, segundo o INMETRO.

Veja quanto tempo, em média, uma dose leva para desaparecer do seu corpo:

Um copo de cerveja (350 ml) - 1 hora
Uma dose de pinga, tequila ou uísque (50 ml) - 1 h e 15 min
Uma dose de vinho (150 ml) - 1 h e 25 min

Veja algumas das principais influências negativas do álcool sobre o motorista:

Exige mais tempo de reação para que os motoristas escapem de acidentes;
Diminui a capacidade de desviar a atenção para pontos mais relevantes (fixação);
Limita a percepção dos motoristas.


Etanol no sangue (gramas/litro)	Estágio	Sintomas
0,1 a 0,5	Sobriedade	Nenhuma influência aparente.
0,3 a 1,2	Euforia	Perda de eficiência, diminuição da atenção, julgamento e controle
0,9 a 2,5	Excitação	Instabilidade das emoções, incoordenação muscular. Menor inibição. Perda do julgamento crítico
1,8 a 3,0	Confusão	Vertigens, desequilíbrio, dificuldade na fala e distúrbios da sensação.
2,7 a 4,0	Estupor	Apatia e inércia geral. Vômitos, incontinência urinária e fezes.
3,5 a 5,0	Coma	Inconsciência, anestesia. Morte
Acima de 5	Morte	Parada respiratória

Dirigir embriagado é uma infração gravíssima. Se ao soprar o bafômetro sua taxa de álcool no sangue der entre 0,1mg/L e 0,3mg/L você terá retenção do veículo até a apresentação de condutor habilitado e recolhimento do documento de habilitação, terá seus direitos de dirigir suspensos por um ano e arcará com a multa de R$ 1.915,40. Contudo, se sua taxa de álcool no sangue der entre 0,4mg/L e 6dg/L, além de você perder a carteira, ter seu direito de dirigir suspenso por um ano e pagar a multa, você será preso em flagrante e responderá um processo penal.

Dá pra enganar o bafômetro?

Algumas pessoas acham que o bafômetro é medido pelo hálito e utilizam algumas técnicas para tentar enganar:

Tomar azeite: Não funciona.

Mascar chiclete: Só engana o parceiro, mas não o bafômetro.

Encher a boca de carvão ativado: Como é muito poroso, o carvão absorveria as moléculas voláteis de álcool na boca, antes que ele chegasse ao aparelho. Funciona pouco. Não o suficiente para evitar uma perda de carteira.

hiperventilação: Inspirar muito ar e depois expirar tudo, repetidas vezes, com força e velocidade, por 20 segundos, aumentaria a concentração de oxigênio nos pulmões, diminuindo a concentração de álcool na baforada.

Reduz em quase 25% a concentração momentânea do álcool nos pulmões. Mas não se engane: essa variação dura pouco e só salva quem bebeu um copinho de cerveja. Se for mais que isso, a multa e a apreensão vêm do mesmo jeito.

Absorvente com Vodca: Não é suficiente, além de perigoso.

Alguns jovens tem utilizado essa e outras técnicas para fugir do teste do bafômetro. Os riscos para quem consome álcool (ânus e vagina) são exatamente os mesmos dos métodos convencionais. O que conta é a quantidade de álcool ingerida, porque independente de onde for, o corpo vai absorver do mesmo jeito. O grande problema é o uso abusivo do álcool, independente da via.

No entanto, além do comportamento extremamente invasivo ao corpo, o ânus, por exemplo, tem mais terminações nervosas e mucosas mais expostas, o que causa uma absorção mais rápida e compromete a percepção da quantidade ingerida.

O único jeito de enganar o bafômetro é a seguinte forma:

FONTE

http://super.abril.com.br/tecnologia/como-funciona-bafometro-447645.shtml
http://www.tecmundo.com.br/infografico/23251-como-funciona-o-bafometro-infografico-.htm
http://pt.wikipedia.org/wiki/Baf%C3%B4metro
http://advogadoembrasilia.wordpress.com/2013/01/22/fui-pego-no-bafometro-e-agora/
http://www.pragmatismopolitico.com.br/2013/05/jovens-consomem-alcool-pelo-anus.html
http://www.cnt.org.br/Imagens%20CNT/teste_bafometro.jpg
http://xpock.com.br/wp-content/uploads/2011/07/cerveja.jpg

Vida e Obra de Samuel Hahnemann - Homeopatia

RESOLUÇÃO Nº 440 DE 22 DE SETEMBRO DE 2005

Método de coloração de GRAM