Aula prática de Análise Farmacêutica 2
Para garantir a qualidade dos produtos farmacêuticos é necessário ter um controle rigoroso da produção dos mesmos.
O método utilizado nessa prática foi o Método de contagem em placa. O método consiste em fazer uma diluição seriada e plaquear uma alíquota de cada diluição pelo método de espalhamento em placa. O limite de crescimento microbiológico é de 30 a 300 colônias por placa.
Para se ter um resultado fidedigno, é necessário esterilizar os materiais a ser utilizados nessa técnica.
A manipulação foi feita por trás da chama do bico de bunsen, de forma a garantir o estabelecimento de uma zona de esterilidade. É somente nesta zona estéril que os tubos ou recipientes com meios de cultura estéreis e o material a ser inoculado, foram ser abertos ou manipulados, para ser preservada a sua esterilidade.
A boca dos tubos de ensaio foi flambada imediatamente após a retirada da tampa (ou tampão de algodão).
OBJETIVO
Determinar o número de microrganismos presente na suspensão através dos métodos de contagem em placa.
MATERIAIS, REAGENTES E EQUIPAMENTOS
· Alça de inoculação;· Algodão;· Balança analítica;· Bico de Bunsen;· Caldo caseína-soja;· Espátula;· Estante;· Estufa;· Fita crepe;· Marcador permanente;· Micropipeta calibrada;· Placas de Petri com meios de cultura;· Ponteiras calibradas;· Solução salina· Solução tampão fosfato;
· Talco em quantidade suficiente para duplicata e triplicata;· Tubos de diluição;· Vidro de relógio.
Observação:
· Realizar testes de esterilidade nos equipamentos e materiais antes de iniciar a amostragem.· Calibrar os equipamentos.
PROCEDIMENTO
Preparo da amostra:
1. Pesou-se 1g de talco na balança analítica, com o auxílio de espátula e vidro de relógio2. Mediu-se 9ml de solução tampão;3. Colocou-se no Becker a solução tampão e o talco e homogeneizou.
Etapas do ensaio
4. Colocou-se 4 tubos identificados na estante, com 9ml de caldo caseína-soja cada.
5. Com o auxílio da micropipeta e ponteira:- Retirou-se 1ml da solução inicial contida no Becker e colocou-se no 1º tubo.- Retirou-se 1ml do 1º tubo e colocou-se no 2º tubo.- Retirou-se 1ml do 2º tubo e colocou-se no 3º tubo.- Retirou-se 1ml do 3º tubo e colocou-se no 4º tubo.6. Tamparam-se todos os tubos com algodão.
7. Identificou-se as tampas da placa de petri, 2 placas para cada tubo: 1.1, 1.2, 2.1, 2.2, 3.1, 3.2, 4.1, 4.2;8. Com o bico de Bunsem ligado:- Colocou-se a ponteira na micropipeta;- Retirou-se 1ml do 1º tubo e impregnou-se a placa 1.1.
- Flambou-se a boca do recipiente o terminar a inoculação e tampou-se- Flambou-se a alça de inoculação (a) e fez-se a semeadura por esgotamento(b);
- Tampou-se a placa.
9. Procedeu-se da mesma forma com todos os tubos e placas.10. Reuniram-se todas as placas de petri, envolveu-se com fita crepe e levou-se à estufa por 7 dias.
ANÁLISE MICROBIOLÓGICA
Após 7 dias na estufa, retirou-se as placas de petri semeadas e colocaram-se na bancada por ordem de semeadura.
Verificou-se que a amostragem e a duplicata não estavam equivalentes, impossibilitando a contagem fidedigna de colônias.
RESULTADO
O resultado foi inconclusivo devido às duplicadas não serem equivalentes. Suspeita-se que houve erro técnico às ponteiras e pipetas não estarem calibradas.
TERMOS E DEFINIÇÕES
· Esterilização: processo de destruição completa ou remoção de microrganismos viáveis.· UFC: Unidade Formadora de Colônias· Plaquear: Colocar células e bactérias sobre um meio semissólido de cultura com o objetivo de cultivá-las.· Equivalentes: Que tem o mesmo valor.· Inconclusivo: Não possui conclusão.· Teste de esterilidade: é a demonstração de que um produto é estéril por meio da realização de um ensaio microbiológico em uma amostra de determinado lote.· Flambar: sinônimo de incendiar.
BIBLIOGRAFIA
- http://www.icb.ufmg.br/mic/index.php?secao=material&material=42 (acessado dia 06/10/2013)
- http://biologia.ifsc.usp.br/micro/outros/Pr%E1tico-te%F3rico.pdf (acessado dia 06/10/2013)
- http://portal.anvisa.gov.br/wps/wcm/connect/789e06004745814c8d77dd3fbc4c6735/CP+N%C2%BA+25+-+M%C3%A9todos.pdf?MOD=AJPERES (acessado dia 06/10/2013)
