Alguns componentes são comuns a todos
os espectrofotômetros, como é verificado a seguir. A luz, habitualmente
fornecida por uma lâmpada, é fracionada pelo prisma ou rede de difração
(monocromador) nos comprimentos de onda que a compõem (luzes
monocromáticas). O comprimento de onda selecionado é dirigido para a
solução contida em um recipiente transparente (cubeta). Parte da luz é
absorvida e parte é transmitida. A redução da intensidade luminosa é
medida pelo detector (célula fotelétrica) porque o sinal elétrico de
saída do detector depende da intensidade da luz que incidiu sobre ele. O
sinal elétrico amplificado e visualizado no galvanômetro em números, é
lido como uma absorbância e é proporcional à concentração da substância
absorvene existente na cubeta. A precisão dos comprimentos de onda para
análise são chamados de bandas de passagem, mais comum na ordem de 10nm.
O espectro da análise mais comum é de 330nm a 1100nm para a faixa
visível.
Os espectrofotômetros são instrumentos de análise que permitem:
Antes de utilizar
um espectrofotômetro sempre é feita uma calibração, que é fundamental
para garantir que as medições obtidas no aparelho sejam precisas. Esta
calibração pode variar em vários espectrofotômetros. A maioria dos
fabricantes fornece um guia sobre como calibrar o aparelho.
É muito importante ao colocar a amostra a ser analisada, não tocar no tubo de ensaio na parte do meio, para evitar manchas de dedo que alteram a leitura do aparelho. Assim, o ideal é pegar na parte superior do tubo e colocá-lo no aparelho para que ele faça a leitura e dê o resultado almejado. Além disto, para que um espectrofotômetro funcione corretamente, deve ser aquecido antes de usar. Muitos dispositivos demoram cerca de 10 minutos para aquecer.
É muito importante ao colocar a amostra a ser analisada, não tocar no tubo de ensaio na parte do meio, para evitar manchas de dedo que alteram a leitura do aparelho. Assim, o ideal é pegar na parte superior do tubo e colocá-lo no aparelho para que ele faça a leitura e dê o resultado almejado. Além disto, para que um espectrofotômetro funcione corretamente, deve ser aquecido antes de usar. Muitos dispositivos demoram cerca de 10 minutos para aquecer.
Esquema óptico dos principais componentes do espectrofotômetro. As letras representam: (a) fonte de luz, (b) colimador, (c) prisma ou rede de difração, (d) fenda seletora de X, (e) compartimento de amostras com cubeta contendo solução, (f) célula fotelétrica, (g) amplificador. |
- Selecionar o comprimento de onda (lâmbda) da radiação adequado à análise de um determinado componente
- Medir a intensidade I do feixe emergente que corresponde a um determinado feixe incidente Io, convertendo o sinal recebido no detector em medida de Absorvância para o comprimento de onda da análise. Em outras palavras, criar o "Branco" e em seguida fazer as medidas com a amostra.
- Determinar a concentração de uma espécie em solução a partir do gráfico da variação de absorvância (ou transmitância) em função da concentração de várias soluções-padrão.